SR-3A Plasmide Double Nickase (h): sc-402999-NIC

HTR3A codifica il recettore umano 3A della 5-idrossitriptamina (serotonina) (SR-3A), un canale ionico regolato da ligando della famiglia dei recettori Cys-loop che forma recettori 5-HT3 omopentamerici o eteropentamerici insieme ad altre subunità. In seguito al legame con la serotonina, SR-3A media un rapido ingresso di cationi per regolare la depolarizzazione di membrana, la segnalazione dipendente dal calcio e il rilascio di neurotrasmettitori, collegando il tono serotoninergico alla trasmissione sinaptica e alla comunicazione neuro-immunitaria. L’attività di HTR3A interseca vie che controllano l’eccitabilità neuronale e programmi trascrizionali a valle responsivi a MAPK/ERK e al cAMP, attraverso cambiamenti dell’omeostasi ionica. Una segnalazione 5-HT3 disregolata è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e gastrointestinali, a supporto dell’indagine di HTR3A nella biologia dell’asse cervello–intestino e nelle risposte cellulari evocate da stimoli.

SR-3A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTR3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTR3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTR3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTR3A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.