SR-2C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400886

Visão geral

HTR2C codifica o receptor humano de serotonina 2C (SR-2C), um receptor acoplado à proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular a sinalização da fosfolipase C, a produção de trifosfato de inositol (IP3), a mobilização intracelular de Ca2+ e a ativação da proteína quinase C (PKC). O SR-2C também envolve vias MAPK/ERK e modula a excitabilidade neuronal e a transmissão sináptica por meio de efeitos sobre a atividade de canais iônicos e a dinâmica de segundos mensageiros. No sistema nervoso central, o HTR2C contribui para a regulação do apetite, do humor, da responsividade ao estresse e de saídas endócrinas, integrando entradas serotoninérgicas com programas transcricionais e metabólicos a jusante. A desregulação da sinalização 5-HT2C e a edição de RNA/variação de splicing no HTR2C têm sido associadas, na literatura de pesquisa, a fenótipos neuropsiquiátricos e metabólicos, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico para estudos de vias e de genótipo–fenótipo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SR-2C (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HTR2C em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HTR2C, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HTR2C na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SR-2C.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HTR2C para a investigação da sinalização de SR-2C, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HTR2C críticos para a função SR-2C
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HTR2C para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SR-2C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SR-2C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HTR2C. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SR-2C Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SR-2C (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HTR2C para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HTR2C definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.