Plásmido CRISPR de Activación (h) SR-2C: sc-400886-ACT

HTR2C codifica el receptor humano de 5‑hidroxitriptamina 2C (SR‑2C), un receptor acoplado a proteína G que señaliza principalmente a través de Gq/11 para activar la fosfolipasa C, incrementar la movilización intracelular de Ca2+ y activar cascadas de fosforilación dependientes de PKC. SR‑2C también influye en la señalización MAPK/ERK y regula la liberación de neurotransmisores mediante la modulación de la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica en circuitos serotoninérgicos. A través de estas vías, HTR2C contribuye al control central del apetito, el estado de ánimo y las salidas endocrinas/autonómicas, y su desregulación se ha vinculado a fenotipos neuropsiquiátricos y metabólicos en estudios experimentales y genéticos. Estas características convierten a HTR2C en una diana útil para investigar la dinámica de señalización de GPCR, los efectos de la edición del receptor/las isoformas y el diálogo cruzado entre vías en modelos celulares neuronales y neuroendocrinos.

SR-2C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTR2C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SR-2C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTR2C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTR2C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SR-2C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTR2C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SR-2C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SR-2C en células tumorales con expresión de HTR2C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.