Plásmido Doble Nickase (h) SR-2B: sc-402574-NIC

HTR2B codifica el receptor humano de 5-hidroxitriptamina 2B (SR-2B), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, el recambio de fosfatos de inositol, la movilización intracelular de Ca²⁺ y la activación aguas abajo de las vías PKC/MAPK. SR-2B también puede activar señalización dependiente de β-arrestina y la desensibilización del receptor, vinculando señales serotoninérgicas con programas transcripcionales que regulan la proliferación celular, la migración y la remodelación de la matriz extracelular. La actividad de HTR2B es relevante para la biología neurovascular y la señalización serotoninérgica periférica, con asociaciones descritas con fenotipos cardiopulmonares y neuropsiquiátricos en estudios genéticos y funcionales. En investigación biomédica, HTR2B se estudia con frecuencia como modulador de la comunicación cruzada entre receptores y del comportamiento de redes de GPCR en sistemas en los que la serotonina determina respuestas de desarrollo, inflamatorias o de remodelación tisular.

SR-2B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HTR2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HTR2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HTR2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HTR2B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.