Plasmide Double Nickase (h) Spo11: sc-404432-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Spo11 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Spo11 Double Nickase (h) et le plasmide Spo11 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SPO11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Spo11 Antibody (C-4): sc-377161
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Spo11 | sc-404432-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **SPO11** code Spo11, une endonucléase de type topoisomérase spécifique de la méiose, qui catalyse la formation programmée de cassures double brin de l’ADN afin d’initier la recombinaison homologue. Les cassures induites par Spo11 permettent la synapsis et la formation de crossing-over grâce à l’activation coordonnée de la réponse aux dommages de l’ADN et des voies de réparation recombinatoire, notamment la signalisation ATM/ATR et la machinerie d’échange de brins. Une altération de la fonction de **SPO11** perturbe le déroulement de la méiose, entraînant une mauvaise ségrégation chromosomique et des phénotypes d’infertilité, et elle est largement pertinente pour les études de la stabilité du génome et du contrôle de la recombinaison.
Spo11 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPO11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPO11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPO11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPO11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.