Plasmide CRISPR/Cas9 KO spectrin α I (h): sc-403563

Présentation

SPTA1 code la spectrine humaine α I, un composant central du squelette membranaire des érythrocytes, qui forme des hétérodimères avec la β-spectrine afin d’assembler un réseau en treillis assurant la stabilité et la déformabilité de la membrane. Ce réseau cytosquelettique relie les protéines membranaires intégrales au complexe jonctionnel basé sur l’actine, coordonnant la résistance mécanique au cours des cycles répétés de contraintes de cisaillement en circulation. Une perturbation de l’architecture de la spectrine altère le maintien de la forme des globules rouges et l’intégrité de la membrane, influençant des processus tels que le trafic membranaire, le remodelage du cytosquelette et l’homéostasie ionique. Les variations génétiques ou un déficit de SPTA1 sont associés à des maladies héréditaires de la membrane des globules rouges, notamment la sphérocytose héréditaire et l’elliptocytose, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les relations génotype–phénotype en biologie érythroïde.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO spectrin α I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPTA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPTA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPTA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine spectrin α I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPTA1 pour l'étude de la signalisation de spectrin α I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPTA1 essentiels à la fonction de spectrin α I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPTA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le spectrin α I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le spectrin α I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPTA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le spectrin α I plasmide HDR (h) et le spectrin α I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPTA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPTA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.