SPACA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406974

概要

SPACA1（sperm acrosome associated 1）は、精子形成過程における先体タンパク質をコードしており、精子頭部の形態形成や、精子形成後期（精子完成＝spermiogenesis）における先体膜の生合成／構築・組織化に関与するとされています。その機能は、先体形成と受精能の獲得を支えるために、協調した小胞輸送、膜リモデリング、細胞骨格の組織化を必要とする雄性生殖細胞の分化過程と関連しています。実験系では、SPACA1活性の変化が精子構造の異常や雄性生殖能の低下と関連づけられており、精子形成不全の機序を研究する上で重要な対象となります。精巣で高発現する因子として、SPACA1は配偶子発生や生殖生物学を制御する経路におけるマーカー、および機能的ハブとしても有用です。

SPACA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPACA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPACA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPACA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPACA1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPACA1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPACA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPACA1の機能に不可欠なSPACA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPACA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPACA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPACA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPACA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPACA1 HDRプラスミド（h）および SPACA1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPACA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPACA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。