Plásmido CRISPR de Activación (m) Sox2: sc-423086-ACT

Sox2 codifica un factor de transcripción con dominio tipo caja HMG (high-mobility group) que actúa como regulador central de la pluripotencia y de la especificación de linajes en el embrión de ratón y en los compartimentos de células madre adultas. SOX2 coopera con OCT4 y NANOG para controlar la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales que mantienen la autorrenovación, a la vez que restringen la diferenciación prematura, con funciones destacadas en el mantenimiento de progenitores neurales y el desarrollo de órganos sensoriales. Participa en redes reguladoras génicas del desarrollo que se interconectan con las vías de señalización Wnt/β-catenina, FGF/ERK, BMP y Notch para coordinar decisiones de destino celular. La expresión desregulada de SOX2 se asocia con anomalías del desarrollo y con frecuencia está implicada en la “stemness” oncogénica, por lo que resulta relevante para modelar in vitro defectos de diferenciación y estados transcripcionales de tipo tumoral.

Sox2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sox2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sox2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sox2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sox2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sox2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sox2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sox2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sox2 en células tumorales con expresión de Sox2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.