Sox-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401854-ACT

SOX5 codifica o fator de transcrição Sox-5, um membro da família SOX que se liga ao DNA por meio de uma caixa HMG e coordena programas de expressão gênica específicos de linhagem durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. Em células humanas, Sox-5 contribui para a regulação da condrogênese e da neurogênese ao modular a atividade de enhancers e cooperar com outros reguladores transcricionais para moldar decisões de diferenciação, proliferação e destino celular. Redes transcricionais associadas a SOX5 se cruzam com vias que controlam a organização da matriz extracelular e a maturação neuronal, vinculando sua atividade a processos que influenciam a arquitetura dos tecidos e a formação de circuitos. A expressão ou função desregulada de SOX5 tem sido implicada em distúrbios do desenvolvimento e em reprogramação transcricional relacionada ao câncer, sustentando seu valor como um nó para o estudo de relações entre genótipo e fenótipo.

Sox-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox-5 em células tumorais com expressão de SOX5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.