Sox-5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401854-ACT

SOX5 kodiert den Transkriptionsfaktor Sox-5, ein Mitglied der SOX-Familie, das über eine HMG-Box an DNA bindet und während der Entwicklung sowie der Gewebehomöostase linienspezifische Genexpressionsprogramme koordiniert. In menschlichen Zellen trägt Sox-5 zur Regulation von Chondrogenese und Neurogenese bei, indem es die Enhancer-Aktivität moduliert und mit anderen transkriptionellen Regulatoren zusammenwirkt, um Differenzierung, Proliferation und Entscheidungen über das Zellschicksal zu steuern. SOX5-assoziierte Transkriptionsnetzwerke überschneiden sich mit Signalwegen, die die Organisation der extrazellulären Matrix und die neuronale Reifung kontrollieren, wodurch seine Aktivität mit Prozessen verknüpft ist, die die Gewebearchitektur und die Ausbildung neuronaler Schaltkreise beeinflussen. Eine fehlregulierte SOX5-Expression oder -Funktion wurde mit Entwicklungsstörungen und krebsassoziiertem transkriptionellem Rewiring in Verbindung gebracht, was seinen Wert als Knotenpunkt für die Untersuchung von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen unterstreicht.

Sox-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOX5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOX5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOX5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox-5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOX5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox-5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox-5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOX5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.