Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMU1: sc-404541-ACT

SMU1 (suppresseur de mec-8 et homologue 1 de unc-52) code un facteur conservé d’épissage du pré-ARNm qui s’associe au spliceosome et favorise une élimination précise des introns ainsi qu’une définition correcte des exons. Grâce à ses interactions avec d’autres régulateurs de l’épissage, SMU1 contribue à l’intégrité du transcriptome, aux choix d’épissage alternatif et, en aval, au contrôle de la progression du cycle cellulaire ainsi qu’aux programmes d’expression génique sensibles au stress. Une perturbation de l’épissage dépendant de SMU1 peut déplacer l’équilibre des isoformes et modifier l’expression de gènes impliqués dans le maintien du génome et la prolifération. En conséquence, une activité spliceosomale dérégulée impliquant SMU1 suscite un intérêt particulier dans les études des défauts de maturation de l’ARN liés à des signatures d’épissage associées aux cancers et à d’autres troubles dus à une maturation aberrante de l’ARNm.

SMU1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMU1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMU1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMU1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMU1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMU1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMU1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMU1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMU1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMU1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.