SMARCD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403091-ACT

SMARCD2 (também conhecido como BAF60B) codifica uma subunidade acessória central do complexo de remodelamento de cromatina SWI/SNF (BAF), dependente de ATP, que ajuda a acoplar fatores de transcrição específicos de sequência ao reposicionamento de nucleossomos. Por meio da regulação da acessibilidade da cromatina, o SMARCD2 influencia programas transcricionais específicos de linhagem que controlam a diferenciação hematopoética, a maturação de células imunes e a expressão gênica responsiva a estímulos. Essa atividade de remodelamento de cromatina integra-se a vias que regulam o início da transcrição, a função de enhancers e a manutenção do estado epigenético ao longo do desenvolvimento e em respostas ao estresse. Alterações na dosagem ou na função de subunidades do SWI/SNF são amplamente relevantes para diferenciação desregulada e circuitos transcricionais oncogênicos, tornando o SMARCD2 um alvo útil para estudos mecanísticos da biologia de doenças impulsionadas pela cromatina.

SMARCD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMARCD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMARCD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMARCD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMARCD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMARCD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMARCD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMARCD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMARCD2 em células tumorais com expressão de SMARCD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.