SLC25A18 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413500

Descripción general

SLC25A18 codifica un transportador de la membrana interna mitocondrial de la familia SLC25 implicado en el transporte de glutamato a través de la membrana mitocondrial, lo que favorece el flujo de nitrógeno entre el citosol y las mitocondrias. Al modular la disponibilidad mitocondrial de aminoácidos, SLC25A18 contribuye a la homeostasis bioenergética, al equilibrio redox y al aporte anaplerótico al ciclo del TCA, influyendo así en las respuestas celulares al estrés nutricional. La alteración del manejo del glutamato en la mitocondria es relevante para la remodelación metabólica y las vías de estrés oxidativo que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en la disfunción neurometabólica. Por ello, SLC25A18 se utiliza como herramienta para estudiar el transporte mitocondrial de sustratos, el metabolismo de aminoácidos y las redes de señalización centradas en la mitocondria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SLC25A18 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC25A18 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC25A18 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC25A18 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SLC25A18.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC25A18 para la investigación de la señalización de SLC25A18, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC25A18 críticos para la función de SLC25A18
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC25A18 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SLC25A18 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SLC25A18 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC25A18. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SLC25A18 (h) y el plásmido HDR SLC25A18 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC25A18 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC25A18 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.