SLC13A5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407118

Übersicht

SLC13A5 kodiert einen natriumabhängigen Citrattransporter (NaCT), der die zelluläre Aufnahme von Citrat vermittelt und so die extrazelluläre Citratverfügbarkeit mit dem intrazellulären Kohlenstofffluss verknüpft. Durch die Beeinflussung der zytosolischen Citratpools unterstützt SLC13A5 die Bildung von Acetyl‑CoA für die de-novo-Lipogenese und Proteinacetylierung und kann Energie-Signalnetzwerke modulieren, die Glykolyse, Anaplerose des TCA-Zyklus und das Redoxgleichgewicht koordinieren. Die Aktivität von SLC13A5 ist am besten in stoffwechselaktiven Geweben und in Neuronen untersucht, wo der Citrattransport mit dem mitochondrialen Stoffwechsel und der epigenetischen Regulation über acetylierungsabhängige Signalwege zusammenwirkt. Genetische Veränderungen von SLC13A5 wurden mit neurometabolischen Funktionsstörungen sowie einer veränderten Lipid- und Glukosehomöostase in Verbindung gebracht, was es für mechanistische Studien metabolischer und neuronaler Phänotypen relevant macht.

Das SLC13A5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC13A5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC13A5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC13A5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC13A5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC13A5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC13A5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC13A5-Exone abzielen, die für die SLC13A5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC13A5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC13A5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SLC13A5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC13A5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC13A5 HDR-Plasmid (h) und SLC13A5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC13A5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC13A5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.