Partículas Lentivirales de Activación (m) SIRT3: sc-425704-LAC

El gen **Sirt3** de ratón codifica la desacetilasa mitocondrial dependiente de NAD+ **SIRT3**, un regulador central del estado de acetilación de las proteínas dentro de la matriz mitocondrial. SIRT3 modula la fosforilación oxidativa, la β‑oxidación de ácidos grasos, el metabolismo de los cuerpos cetónicos y las defensas antioxidantes mediante la desacetilación de enzimas como SOD2 y de componentes de la cadena de transporte de electrones, influyendo así en la producción de ATP y en la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. A través de sus vínculos con la señalización AMPK–PGC‑1α, la biogénesis mitocondrial y las respuestas al estrés, SIRT3 se estudia ampliamente en la adaptación metabólica y en la disfunción mitocondrial asociada al envejecimiento. La alteración de la actividad de SIRT3 y la hiperacetilación de proteínas mitocondriales se han asociado con neurodegeneración, estrés cardiometabólico y biología tumoral en sistemas preclínicos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en vías relevantes para enfermedades mitocondriales.

Las partículas de activación lentiviral SIRT3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Sirt3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SIRT3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Sirt3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SIRT3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Sirt3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.