Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SIRT3 Double Nickase Plasmid (m): sc-425704-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIRT3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIRT3 Double-Nickase-Plasmid (m) und SIRT3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sirt3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SIRT3: sc-365175
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIRT3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425704-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425704-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Sirt3** kodiert die mitochondriale, NAD⁺-abhängige Deacetylase **SIRT3**, einen zentralen Regulator der mitochondrialen Proteinacetylierung und des oxidativen Stoffwechsels. SIRT3 moduliert über die Deacetylierung wichtiger mitochondrialer Enzyme Signal- und Stoffwechselwege wie die β‑Oxidation von Fettsäuren, den Citratzyklus (TCA‑Zyklus), die Aktivität der Atmungskette sowie die Entgiftung reaktiver Sauerstoffspezies. Indem SIRT3 die mitochondriale Atmung, das Redoxgleichgewicht und zelluläre Stressantworten mitprägt, beeinflusst es die metabolische Anpassung in Geweben mit hohem Energiebedarf. In präklinischen Studien wurde eine veränderte SIRT3‑Aktivität mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, die für metabolischen Stress, Modelle der Neurodegeneration und entzündungsassoziierte Gewebeschädigung relevant sind.
SIRT3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sirt3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sirt3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sirt3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sirt3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.