Plásmido Doble Nickase (h) SHIP-2: sc-401622-NIC

INPPL1 codifica SHIP-2, una fosfatasa de inositol 5 con dominio de homología 2 de Src que hidroliza el fosfatidilinositol (3,4,5)-trisfosfato a fosfatidilinositol (3,4)-bisfosfato, ajustando la amplitud y la duración de la señalización PI3K–AKT. Al modular los reservorios de fosfoinosítidos, SHIP-2 influye en la señalización del receptor de insulina, el tráfico de membrana, la dinámica del citoesqueleto y la endocitosis de receptores, con efectos posteriores sobre la homeostasis de la glucosa y los programas de crecimiento celular. La actividad o expresión alteradas de SHIP-2 se han asociado con resistencia a la insulina y rasgos metabólicos, y el control desregulado de la vía PI3K también vincula a INPPL1 con estudios sobre señalización oncogénica, migración y la interacción entre rutas inflamatorias. Estas funciones hacen de SHIP-2 un nodo útil para diseccionar mecanismos de retroalimentación dependientes de fosfatasas en redes de señalización.

SHIP-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus INPPL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de INPPL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de INPPL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con INPPL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.