Plasmide CRISPR/Cas9 KO SHBG (h): sc-402099

Présentation

La globuline liant les hormones sexuelles (SHBG) est une glycoprotéine plasmatique sécrétée qui se lie aux androgènes et aux œstrogènes et les transporte, régulant ainsi la fraction libre des stéroïdes circulants et modulant la disponibilité des hormones pour les tissus cibles. En tamponnant la distribution des stéroïdes et en influençant l’acheminement des hormones vers les cellules, la SHBG contribue à l’homéostasie endocrinienne et aux programmes transcriptionnels sensibles aux stéroïdes qui façonnent la physiologie métabolique et reproductive. Des variations de l’expression ou de la fonction de la SHBG ont été associées à une modification de la biodisponibilité des stéroïdes sexuels et sont fréquemment étudiées en lien avec des traits métaboliques et la biologie des maladies hormono-dépendantes, notamment les perturbations du métabolisme glucido-lipidique et des phénotypes endocriniens reproductifs. Des modèles in vitro et in vivo de perturbation de la SHBG sont utilisés pour disséquer les mécanismes reliant le transport des stéroïdes aux réseaux de signalisation en aval et aux changements d’expression génique dans le foie et les tissus périphériques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SHBG (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SHBG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SHBG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SHBG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SHBG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SHBG pour l'étude de la signalisation de SHBG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SHBG essentiels à la fonction de SHBG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SHBG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SHBG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SHBG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SHBG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SHBG plasmide HDR (h) et le SHBG (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SHBG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SHBG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.