SgK269 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403322-ACT

PEAK1 (também conhecido como SgK269) codifica uma pseudocinase associada ao citoesqueleto que atua como uma proteína de andaime, integrando sinais de receptores tirosina-quinase e da adesão mediada por integrinas. Ela regula a dinâmica das adesões focais, a remodelação de actina e a motilidade celular por meio de interações que influenciam a sinalização de SRC/FAK e vias a jusante, como MAPK/ERK e PI3K/AKT. PEAK1 contribui para fenótipos invasivos ao coordenar complexos de sinalização dependentes de fosforilação e ao modular processos relacionados à transição epitélio–mesênquima. Alterações na expressão de PEAK1 e no engajamento dessas vias têm sido associadas à progressão tumoral e ao comportamento metastático em diversos contextos de câncer, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de adesão e migração.

SgK269 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PEAK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SgK269 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PEAK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PEAK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SgK269. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PEAK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SgK269 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SgK269 em células tumorais com expressão de PEAK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.