Plasmide CRISPR/Cas9 KO SerpinB6 (h): sc-417434

Présentation

SERPINB6 code pour SerpinB6, un inhibiteur intracellulaire des sérine-protéases de la clade B qui contribue à la cytoprotection en neutralisant une activité protéasique aberrante et en limitant les dommages cellulaires induits par la protéolyse. En restreignant l’action des sérine-protéases dans le cytosol et le noyau, SerpinB6 soutient la protéostasie et les processus de réponse au stress qui influencent la survie cellulaire, la différenciation et la signalisation inflammatoire. L’expression de SERPINB6 est particulièrement pertinente dans les contextes épithéliaux et immunitaires, où l’équilibre protéases–antiprotéases façonne la fonction de barrière et l’homéostasie tissulaire. Une activité des serpines dérégulée a été associée à une susceptibilité modifiée au stress protéotoxique et à des pathologies inflammatoires, faisant de SERPINB6 une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle intracellulaire des protéases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SerpinB6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SERPINB6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SERPINB6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SERPINB6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SerpinB6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SERPINB6 pour l'étude de la signalisation de SerpinB6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SERPINB6 essentiels à la fonction de SerpinB6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SERPINB6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SerpinB6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SerpinB6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SERPINB6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SerpinB6 plasmide HDR (h) et le SerpinB6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SERPINB6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SERPINB6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.