SERCA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401416-NIC

ATP2A1 codifica la Ca²⁺-ATPasi del reticolo sarcoplasmatico/endoplasmatico SERCA1, un’ATPasi di tipo P che pompa il Ca²⁺ citosolico nel reticolo sarcoplasmatico per ripristinare bassi livelli basali di Ca²⁺ dopo l’eccitazione. Promuovendo la sequestrazione del Ca²⁺, SERCA1 modella l’accoppiamento eccitazione–contrazione, la segnalazione dipendente dal Ca²⁺ e l’omeostasi del Ca²⁺ nel RE/RS, che influenza la proteostasi e le risposte allo stress. La funzione di SERCA1 si integra con vie che controllano il ciclo del calcio e l’energetica muscolare, inclusa l’interazione con il rilascio di Ca²⁺ mediato dal recettore della rianodina e con il buffering della calsequestrina. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di ATP2A1 sono state associate a fenotipi di disfunzione del muscolo scheletrico, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla gestione del calcio e sulla fisiologia delle miofibre.

SERCA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP2A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP2A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP2A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP2A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.