secretin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422831

Visão geral

O gene Sct de camundongo codifica a secretina, um hormônio peptídico e neuropeptídeo que sinaliza principalmente por meio do receptor de secretina (SCTR), um GPCR de classe B que ativa a adenilil ciclase e programas de transcrição dependentes de cAMP/PKA. A secretina contribui para a regulação da secreção pancreática de fluido rico em bicarbonato, da função biliar e da motilidade gastrointestinal, e também modula a excitabilidade neuronal e a sinalização hipotálamo–hipófise. Por meio de vias ligadas ao cAMP e de processos subsequentes de transporte iônico, o Sct influencia a homeostase de fluidos epiteliais e a comunicação neuroendócrina. Alterações na sinalização da secretina têm sido estudadas em contextos de disfunção pancreática e biliar, regulação metabólica e do apetite, e fenótipos do sistema nervoso central relevantes para pesquisas em neurodesenvolvimento e gastroenterologia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO secretin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sct em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sct, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sct na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína secretin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sct para a investigação da sinalização de secretin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sct críticos para a função secretin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sct para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo secretin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo secretin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sct. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo secretin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR secretin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sct para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sct definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.