SCO2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402686

Visão geral

SCO2 codifica uma metalocaperona associada à membrana interna mitocondrial, necessária para a biogénese da citocromo c oxidase (complexo IV), ao fornecer cobre à subunidade COX2 e apoiar a montagem da cadeia respiratória. Através do seu papel na fosforilação oxidativa, o SCO2 ajuda a manter o potencial de membrana mitocondrial, a produção de ATP e a homeostase redox, ligando-o ao metabolismo energético celular e às respostas ao stress. A disrupção de SCO2 compromete a atividade do complexo IV e pode deslocar as células para estados metabólicos alterados, afetando processos como o controlo de espécies reativas de oxigénio e a sensibilidade à apoptose. Variantes patogénicas no SCO2 humano estão associadas a fenótipos graves de encefalocardiomiopatia mitocondrial e a cardiomiopatia, tornando-o um alvo relevante para estudar mecanismos de doenças mitocondriais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SCO2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SCO2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SCO2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SCO2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SCO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SCO2 para a investigação da sinalização de SCO2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SCO2 críticos para a função SCO2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SCO2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SCO2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SCO2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SCO2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SCO2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SCO2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SCO2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SCO2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.