SATB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431818

Übersicht

Satb2 kodiert SATB2, einen mit der nukleären Matrix assoziierten transkriptionellen Regulator, der an AT-reiche DNA-Elemente bindet und höherstufige Chromatinstrukturen organisiert, um linien-/zelltypspezifische Genexpressionsprogramme in Maus-Zellen zu koordinieren. SATB2 beeinflusst entwicklungsbezogene Transkriptionsnetzwerke und die epigenetische Regulation und wirkt sich auf Prozesse wie Differenzierung, Gewebemusterbildung und neuronale Reifung aus – unter anderem durch die Modulation der Chromatinzugänglichkeit und weitreichender Enhancer-Promotor-Interaktionen. Im Immunsystem und in anderen Geweben integrieren Proteine der SATB-Familie signalabhängige transkriptionelle Antworten, indem sie die Genomarchitektur und die Rekrutierung von Koregulatoren mitgestalten. Eine fehlregulierte SATB2-Aktivität ist mit veränderten Differenzierungszuständen und aberranten Genexpressionssignaturen verbunden, die für Entwicklungsphänotypen und krankheitsassoziierte Umprogrammierungen der Transkription relevant sind.

Das SATB2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Satb2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Satb2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Satb2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SATB2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Satb2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SATB2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Satb2-Exone abzielen, die für die SATB2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Satb2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SATB2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SATB2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Satb2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SATB2 HDR-Plasmid (m) und SATB2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Satb2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Satb2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.