Sam50 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427129

Descripción general

Samm50 codifica Sam50, una proteína esencial de barril β de la membrana externa mitocondrial que constituye el núcleo del complejo de maquinaria de clasificación y ensamblaje (SAM). Sam50 coordina la biogénesis y la inserción en la membrana de proteínas de barril β y se interconecta funcionalmente con los sistemas de importación de proteínas mitocondriales, contribuyendo a la organización de la membrana externa y a la homeostasis mitocondrial. Debido a su papel en el mantenimiento de la arquitectura mitocondrial, la importación de proteínas y procesos ligados a la respiración, la alteración de la función del complejo SAM es relevante para estudios de disfunción mitocondrial, señalización por estrés y vías asociadas con neurodegeneración y fenotipos de enfermedades metabólicas en sistemas modelo. En células de ratón, la perturbación de Samm50 también se utiliza para investigar el control de calidad mitocondrial, incluido el crosstalk con la mitofagia y la señalización de apoptosis intrínseca.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sam50 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Samm50 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Samm50 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Samm50 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sam50.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Samm50 para la investigación de la señalización de Sam50, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Samm50 críticos para la función de Sam50
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Samm50 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sam50 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sam50 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Samm50. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sam50 (m) y el plásmido HDR Sam50 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Samm50 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Samm50 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.