Sam50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404298

Übersicht

SAMM50 kodiert Sam50, eine zentrale Komponente des Sorting-and-Assembly-Machinery‑(SAM-)Komplexes in der äußeren Mitochondrienmembran, der die Insertion und Assemblierung von β‑Fass‑Proteinen (β‑barrel) fördert und über Interaktionen mit dem MICOS-Netzwerk die Organisation der Cristae unterstützt. Durch die Aufrechterhaltung der Architektur der Mitochondrienmembran und der Proteostase beeinflusst Sam50 die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung, die mitochondriale Dynamik sowie stressresponsive Signalwege, die mit dem Energiestoffwechsel verknüpft sind. Eine Störung von SAMM50 ist mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion assoziiert und wurde in der Literatur mit metabolischen Merkmalen sowie zellulärem Stress im Zusammenhang mit Neurodegeneration in Verbindung gebracht, was es für mechanistische Studien zur Qualitätskontrolle von Organellen relevant macht. SAMM50 wird außerdem als Knotenpunkt genutzt, um zu untersuchen, wie Defekte in der Biogenese von Proteinen der äußeren Membran die Anfälligkeit für Apoptose und die durch mitochondriale Störungen ausgelöste angeborene Immun-Signalgebung beeinflussen.

Das Sam50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SAMM50-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SAMM50-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SAMM50 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sam50-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SAMM50-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sam50-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SAMM50-Exone abzielen, die für die Sam50-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SAMM50-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sam50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Sam50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SAMM50-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sam50 HDR-Plasmid (h) und Sam50 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SAMM50-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SAMM50-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.