S-100A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405822

Übersicht

S100A3 kodiert S-100A3, ein kalziumbindendes Protein der S100-Familie, das in verhornenden Epithelien und in der Biologie des Haarfollikels angereichert ist und dort zur Organisation des Zytoskeletts sowie zu Programmen der zellulären Differenzierung beiträgt. Durch Ca²⁺-abhängige Konformationsänderungen kann S-100A3 an Protein-Protein-Interaktionen teilnehmen, die den strukturellen Umbau von Epithelien und redoxsensitive Prozesse beeinflussen. Eine fehlregulierte Expression von S100-Proteinen, einschließlich S100A3, wurde in Epithelgeweben mit veränderten Differenzierungszuständen, inflammatorischer Signalgebung und tumorassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht. Daher wird S100A3 häufig in Studien zur Epithelentwicklung, zu Stressantworten und zu krankheitsrelevanten Veränderungen der Gewebearchitektur untersucht.

Das S-100A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des S100A3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des S100A3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von S100A3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die S-100A3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von S100A3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der S-100A3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf S100A3-Exone abzielen, die für die S-100A3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere S100A3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom S-100A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom S-100A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des S100A3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das S-100A3 HDR-Plasmid (h) und S-100A3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von S100A3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten S100A3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.