RYK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402654

Übersicht

RYK (rezeptorähnliche Tyrosinkinase) kodiert einen atypischen, einfach durch die Membran verlaufenden Transmembranrezeptor, der hauptsächlich als Korezeptor in der nicht-kanonischen WNT-Signalübertragung fungiert, einschließlich WNT5A-getriebener Signalwege, die Zellpolarität, gerichtete Migration und die Dynamik des Zytoskeletts regulieren. Über Interaktionen mit WNT-Liganden und Frizzled-Rezeptoren kann RYK die planare Zellpolarität und nachgeschaltete Effektoren wie JNK beeinflussen und so extrazelluläre Signale mit transkriptionellen und morphogenetischen Programmen verknüpfen. Die RYK-Aktivität wurde mit der neuronalen Entwicklung und der Axonlenkung in Verbindung gebracht; zudem wurde eine fehlregulierte RYK/WNT-Signalgebung in Kontexten von Tumorzellinvasion, metastaseassoziierten Phänotypen und entzündlichen Mikroumgebungen beschrieben. Diese Eigenschaften machen RYK zu einem nützlichen Ziel, um das Zusammenspiel zwischen WNT-Signalgebung, Zelladhäsion und Migrationsverhalten in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Das RYK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RYK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RYK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RYK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RYK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RYK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RYK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RYK-Exone abzielen, die für die RYK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RYK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RYK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RYK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RYK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RYK HDR-Plasmid (h) und RYK HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RYK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RYK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.