RUNX2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400183-NIC

RUNX2 codifica il fattore di trascrizione 2 correlato a runt (RUNX2), un regolatore maestro dell'impegno di linea degli osteoblasti e della morfogenesi scheletrica, che si lega a elementi consenso RUNX per coordinare programmi genici che controllano la produzione di matrice extracellulare e la mineralizzazione. Integra segnali dalle vie BMP/TGF-β, Wnt/β-catenina, MAPK e Hedgehog per regolare la differenziazione, la progressione del ciclo cellulare e le reti trascrizionali nei progenitori mesenchimali. L'attività di RUNX2 modella la cromatina e coopera con cofattori come CBFB per promuovere l'espressione di geni osteogenici, tra cui COL1A1, ALPL e BGLAP. Un'espressione o una funzione disregolata di RUNX2 è implicata in disturbi scheletrici dello sviluppo, in alterazioni dell'omeostasi ossea e in ruoli dipendenti dal contesto nella progressione tumorale e nelle metastasi, attraverso effetti su programmi trascrizionali associati all'EMT e sul rimodellamento della matrice.

RUNX2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RUNX2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RUNX2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RUNX2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RUNX2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.