Particules Lentivirales d'Activation (h) Rtn-3: sc-404072-LAC

RTN3 code la réticulon-3 (Rtn-3), une protéine membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui contribue à façonner l’architecture tubulaire du RE et participe à la dynamique du trafic RE–Golgi. Rtn-3 est impliquée dans la protéostasie et la réponse cellulaire aux protéines mal repliées, ce qui la relie à la signalisation du stress du RE et aux voies associées qui influencent l’homéostasie neuronale. Dans le système nerveux, RTN3 a été associé à la maturation de la protéine précurseur de l’amyloïde et à la biologie des neurites, ce qui soutient les recherches sur les mécanismes à l’origine de phénotypes neurodégénératifs. Une altération de l’expression ou de la localisation de RTN3 a également été reliée à des perturbations du trafic membranaire et de la fonction synaptique, ce qui en fait une cible utile pour disséquer la régulation du réseau du RE dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales Rtn-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RTN3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rtn-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RTN3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rtn-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RTN3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.