Plasmide CRISPR/Cas9 KO RPRD1B (h): sc-412911

Présentation

RPRD1B code un régulateur de l’ARN polymérase II interagissant avec le CTD, qui contribue à coordonner l’initiation, l’élongation et la terminaison de la transcription en modulant les états de phosphorylation du CTD de la polymérase. En reliant le contrôle transcriptionnel à la maturation des ARNm, RPRD1B participe à des programmes globaux d’expression génique, notamment aux réseaux transcriptionnels du cycle cellulaire et de réponse au stress. Une expression ou une fonction dérégulée de RPRD1B a été associée à des altérations de l’homéostasie transcriptionnelle observées dans des contextes liés au cancer, où des modifications de la dynamique de l’ARN polymérase II peuvent affecter la prolifération et la stabilité du génome. En tant que régulateur transcriptionnel nucléaire, il est également pertinent pour des études mécanistiques de la maturation de l’ARN couplée à la transcription et de la régulation associée à la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RPRD1B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RPRD1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RPRD1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RPRD1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RPRD1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RPRD1B pour l'étude de la signalisation de RPRD1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RPRD1B essentiels à la fonction de RPRD1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RPRD1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RPRD1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RPRD1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RPRD1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RPRD1B plasmide HDR (h) et le RPRD1B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RPRD1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RPRD1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.