RP58 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407058

Panoramica

ZBTB18 codifica il repressore trascrizionale RP58, dotato di dita di zinco e dominio BTB, un regolatore nucleare che modula programmi di espressione genica alla base dello sviluppo neurale, della specificazione del destino cellulare e della differenziazione. RP58 contribuisce al controllo trascrizionale associato alla cromatina reclutando complessi corepressori e plasmando reti trascrizionali specifiche di linea che influenzano proliferazione e maturazione. Nelle cellule umane, un’alterata attività di ZBTB18/RP58 è stata collegata a processi neuro-sviluppativi deregolati e a stati trascrizionali aberranti osservati in contesti patologici, rendendolo rilevante per lo studio dell’architettura della regolazione genica. I suoi effetti a valle intersecano vie che controllano la maturazione neuronale, la dinamica del ciclo cellulare e la programmazione epigenetica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RP58 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZBTB18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZBTB18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZBTB18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RP58.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZBTB18 per lo studio della segnalazione di RP58, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZBTB18 critici per la funzione di RP58
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZBTB18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RP58 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RP58 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZBTB18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RP58 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RP58 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZBTB18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZBTB18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.