ROG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406421

Panoramica

ZBTB32 codifica il fattore di trascrizione ROG, una proteina a dita di zinco con dominio BTB/POZ che modula programmi di espressione genica deputati al controllo dell’attivazione, della differenziazione e della funzione effettrice dei linfociti. ROG partecipa alla repressione trascrizionale e alla regolazione associata alla cromatina di geni delle citochine e di geni dipendenti dall’attivazione, influenzando vie legate all’omeostasi immunitaria e alle risposte guidate dall’antigene. Nelle cellule immunitarie umane, un’attività alterata di ZBTB32 è stata associata a una deregolazione della segnalazione infiammatoria e a cambiamenti dipendenti dal contesto nella funzione delle cellule T e B, a supporto della sua rilevanza negli studi sui meccanismi delle malattie immunomediate. In quanto nodo regolatorio, ZBTB32 è spesso indagato in modelli di tolleranza immunitaria, esaurimento immunitario e rimodellamento trascrizionale responsivo agli stimoli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ROG (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZBTB32 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZBTB32 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZBTB32 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ROG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZBTB32 per lo studio della segnalazione di ROG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZBTB32 critici per la funzione di ROG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZBTB32 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ROG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ROG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZBTB32. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ROG Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ROG (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZBTB32 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZBTB32 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.