Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
robo2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435289
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- robo2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico robo2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: robo2 Anticuerpo (A-10): sc-376177
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
robo2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-435289 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ROBO2 (receptor 2 de guía por rotonda) codifica un receptor transmembrana del eje de señalización SLIT/ROBO que regula la guía axonal, la migración neuronal y la morfogénesis tisular mediante la remodelación del citoesqueleto y el movimiento celular direccional. En el ratón, la función de robo2 está vinculada al desarrollo del sistema nervioso y de múltiples estructuras epiteliales, con efectos downstream en vías que controlan la polaridad celular, la adhesión y las señales repulsivas de guía. La alteración de la actividad de ROBO2 se ha asociado con anomalías congénitas del desarrollo y fenotipos de migración celular desregulada, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del neurodesarrollo y la organogénesis. Su señalización se conecta con procesos dependientes de GTPasas de la familia Rho que moldean la dinámica del cono de crecimiento y el posicionamiento celular coordinado.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO robo2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Robo2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Robo2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Robo2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína robo2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Robo2 para la investigación de la señalización de robo2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Robo2 críticos para la función de robo2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Robo2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido robo2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido robo2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Robo2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR robo2 (m) y el plásmido HDR robo2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Robo2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Robo2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.