Plásmido CRISPR de Activación (h) RNF213: sc-418450-ACT

RNF213 codifica una gran ligasa E3 de ubiquitina con dominio RING y actividad ATPasa AAA+ que contribuye a la proteostasis dependiente de ubiquitina y a la remodelación de la señalización celular en respuesta al estrés. En células humanas, RNF213 se ha vinculado con la regulación de programas inmunitarios innatos e inflamatorios, incluidas respuestas asociadas al interferón, y con el control de procesos vasculares y angiogénicos mediante la modulación del recambio de proteínas y la interconexión entre vías de señalización. La variación genética y la alteración de la expresión de RNF213 se han asociado con fenotipos cerebrovasculares y vasculopáticos, incluida la enfermedad de moyamoya, y se han investigado en contextos de función endotelial y activación inmunitaria. Estas propiedades convierten a RNF213 en un objetivo relevante para desentrañar la señalización por ubiquitina, la biología vascular y los mecanismos moleculares ligados a la inflamación en modelos celulares pertinentes para enfermedad.

RNF213 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RNF213 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RNF213 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RNF213 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RNF213, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RNF213. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RNF213 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RNF213 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RNF213 en células tumorales con expresión de RNF213 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.