Plásmido Doble Nickase (h) Ribosomal Protein S3: sc-402327-NIC

RPS3 codifica la proteína ribosomal humana S3, un componente central de la subunidad ribosomal pequeña 40S, necesaria para el inicio preciso de la traducción y la decodificación del ARNm. Más allá de su papel estructural en la biogénesis del ribosoma, RPS3 se ha asociado con respuestas al estrés celular y con la regulación de vías de señalización que coordinan la síntesis de proteínas con el crecimiento y la vigilancia del daño en el ADN. Las alteraciones en la homeostasis de las proteínas ribosomales pueden perturbar el control traduccional y la proteostasis, procesos implicados con frecuencia en la biología tumoral y en otros trastornos caracterizados por una proliferación celular desregulada. En consecuencia, RPS3 se estudia ampliamente en el contexto de la función ribosomal, los programas transcripcionales adaptativos al estrés y los mecanismos que conectan la traducción con la integridad del genoma.

Ribosomal Protein S3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RPS3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RPS3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RPS3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RPS3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.