RhoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400875

概要

RHOB は、Rho ファミリーに属するプレニル化小型 GTPase である RhoB をコードしており、アクチン細胞骨格の動態、エンドサイトーシス輸送、膜受容体のターンオーバーを制御します。RhoB は GDP 結合型と GTP 結合型の間を循環し、細胞接着、遊走、小胞輸送、ストレス応答に関連するシグナル伝達ノードを調節します。また、Rho/ROCK 経路や、より広範には MAPK および PI3K の影響を受けるプロセスを含む経路群と機能的に結び付いています。近縁の Rho GTPase とは異なり、RhoB はエンドソーム膜に多く局在し、細胞ストレスによってしばしば誘導されることから、シグナルのコンパートメント化を担う重要なメディエーターとして位置付けられます。RHOB の発現や活性の変化は、がん関連形質、炎症性シグナル、血管生物学と関連付けられており、増殖・浸潤・受容体駆動型シグナル伝達の機序研究において重要です。

RhoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRHOB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RHOB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RHOBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RhoBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RhoBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RHOB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RhoBの機能に不可欠なRHOBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RHOBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RhoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRhoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RHOB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RhoB HDRプラスミド（h）および RhoB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRHOBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRHOB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。