Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho T2 (h): sc-406496

Présentation

RHOT2 code la protéine Rho T2 (également appelée Miro2), une GTPase atypique de la famille Rho ancrée dans la membrane externe des mitochondries, qui contribue à coordonner le trafic, le positionnement et le contrôle qualité des mitochondries. Grâce à ses interactions avec des protéines adaptatrices reliant les mitochondries aux moteurs des microtubules, RHOT2 participe au transport dépendant du cytosquelette et soutient la répartition mitochondriale nécessaire dans les régions cellulaires à forte demande énergétique. Rho T2 est également impliquée dans la régulation, sensible au calcium, de la dynamique et du renouvellement des mitochondries, en s’articulant avec des voies qui gouvernent l’homéostasie mitochondriale et les réponses au stress. Un dysfonctionnement de RHOT2 a été étudié dans le contexte d’altérations de la dynamique mitochondriale et de la bioénergétique, des processus fréquemment associés à la neurodégénérescence et à la reprogrammation métabolique liée au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho T2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHOT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHOT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHOT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rho T2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHOT2 pour l'étude de la signalisation de Rho T2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHOT2 essentiels à la fonction de Rho T2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHOT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rho T2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rho T2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHOT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rho T2 plasmide HDR (h) et le Rho T2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHOT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHOT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.