Rho G CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402608

Übersicht

RHOG kodiert Rho G, ein Mitglied der Rho-Familie kleiner GTPasen, das als molekularer Schalter fungiert und Rezeptorsignale mit dem Umbau des Aktinzytoskeletts verknüpft. Rho G reguliert Membrane Ruffling, Zell-Ausbreitung (Spreading) und Migration, indem es Signalwege koordiniert, die auf die Aktivität von Rac1 und Cdc42 zusammenlaufen, und indem es die integrinabhängige Dynamik der Zelladhäsion unterstützt. Über diese Prozesse beeinflusst RHOG den endozytischen Transport sowie Funktionen von Immunzellen wie Phagozytose und antigengetriebene Antworten. Eine fehlregulierte Rho-G-Signalgebung wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen eine veränderte Kontrolle des Zytoskeletts zu aberranter Zellbeweglichkeit und entzündlichen Phänotypen beiträgt, was es für mechanistische Studien zur Invasion von Krebszellen und zum Verhalten von Immunzellen relevant macht.

Das Rho G CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RHOG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RHOG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RHOG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rho G-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RHOG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rho G-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RHOG-Exone abzielen, die für die Rho G-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RHOG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rho G CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rho G CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RHOG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rho G HDR-Plasmid (h) und Rho G HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RHOG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RHOG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.