RHAMM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420881

Descripción general

Hmmr codifica RHAMM (receptor de la motilidad mediada por hialuronano), una proteína que interactúa con microtúbulos y con el hialuronano y que coordina la organización del citoesqueleto, la función del centrosoma y el ensamblaje del huso mitótico. RHAMM contribuye a la migración y proliferación celular al integrar señales de la matriz extracelular con la dinámica intracelular de los microtúbulos y con vías de señalización vinculadas a la motilidad y a la progresión del ciclo celular. En sistemas murinos, la actividad alterada de RHAMM se ha asociado con mitosis desregulada, inestabilidad genómica y procesos anómalos de remodelación tisular relevantes para la biología del cáncer y los microambientes inflamatorios. Estas características hacen de Hmmr un objetivo útil para dilucidar cómo la señalización del hialuronano se integra con la regulación del huso y los programas de motilidad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RHAMM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hmmr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hmmr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hmmr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RHAMM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hmmr para la investigación de la señalización de RHAMM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hmmr críticos para la función de RHAMM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hmmr para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RHAMM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RHAMM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hmmr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RHAMM (m) y el plásmido HDR RHAMM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hmmr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hmmr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.