Rfp2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403870

Übersicht

TRIM13 kodiert die humane RING-Finger-E3-Ubiquitin-Ligase Rfp2, ein überwiegend mit dem endoplasmatischen Retikulum (ER) assoziiertes Protein, das an der ubiquitinabhängigen Proteostase und der ER-Qualitätskontrolle beteiligt ist. Rfp2 trägt zur Regulation des Proteinumsatzes und stressresponsiver Signalwege bei, indem es die Ubiquitinierung von Substraten fördert, und ist damit mit Prozessen wie dem ER-assoziierten Abbau (ERAD), der Regulation der Apoptose und der Modulation angeborener Immunsignalwege verknüpft. Veränderte TRIM13-Expression oder -Aktivität wurde im Kontext zellulärer Stressanpassung und fehlregulierter Ubiquitin-Signalgebung untersucht, die zu onkogenen Phänotypen und neurodegenerativen Proteinopathien beitragen kann. Als Mitglied der TRIM-Familie stellt Rfp2 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um die Verschaltung von Ubiquitin-Signalwegen und organelllokalisierte Signalübertragung in humanen Zellen zu analysieren.

Das Rfp2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIM13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIM13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIM13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rfp2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIM13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rfp2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIM13-Exone abzielen, die für die Rfp2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIM13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rfp2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rfp2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIM13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rfp2 HDR-Plasmid (h) und Rfp2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIM13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIM13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.