Plásmido Doble Nickase (m) Ret: sc-422654-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Ret consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ret (m) y el plásmido de doble nickasa Ret (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ret. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ret Anticuerpo (6E4C4): sc-101423
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Ret | sc-422654-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ret codifica una tirosina quinasa receptora que actúa como un centro de señalización para los ligandos de la familia GDNF a través de correceptores GFRα, coordinando programas de desarrollo neuronal y renal en el ratón. Tras su activación, RET activa las vías canónicas MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ para regular la supervivencia celular, la diferenciación, la migración y la guía axonal. La actividad de Ret es fundamental en linajes derivados de la cresta neural y en la formación del sistema nervioso entérico, y su desregulación se asocia con defectos del neurodesarrollo y con contextos de señalización oncogénica. Como nodo de vía, Ret se estudia ampliamente para desentrañar la señalización por factores de crecimiento, la especificación de linaje y las respuestas transcripcionales impulsadas por receptores.
Ret El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ret en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ret. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ret. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ret alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.