resistin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402649-ACT

Il gene umano **RETN** codifica la resistina, un’adipochina secreta ricca di cisteine, nota soprattutto per collegare lo stato metabolico alla segnalazione infiammatoria. La resistina modula la sensibilità all’insulina e l’omeostasi del glucosio e può promuovere la produzione di citochine attraverso vie come la segnalazione **NF-κB** e **MAPK** in diversi tipi cellulari immunitari e metabolici. Un’alterata espressione di **RETN** è stata associata a disfunzioni metaboliche legate all’obesità, diabete di tipo 2 e infiammazione cronica di basso grado, ed è anche studiata in ambito cardiovascolare e nelle malattie autoimmuni. In quanto mediatore circolante, la resistina è spesso utilizzata come parametro per valutare il crosstalk tra tessuto adiposo e sistema immunitario e i programmi trascrizionali responsivi allo stress.

resistin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RETN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

resistin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RETN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RETN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di resistin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RETN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da resistin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via resistin nelle cellule tumorali con espressione di RETN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.