Plasmide CRISPR d'Activation (h) RECK: sc-402440-ACT

RECK (reversion-inducing cysteine-rich protein à motifs Kazal) est un régulateur ancré à la membrane du remodelage de la matrice extracellulaire, qui supprime l’activité de plusieurs métalloprotéinases matricielles, notamment MMP2, MMP9 et MT1-MMP. En limitant la protéolyse à la surface cellulaire, RECK influence l’adhérence cellule–matrice, la migration et l’architecture tissulaire, avec des effets en aval sur l’angiogenèse et le comportement invasif. RECK a été associé à des contextes de signalisation qui coordonnent les dynamiques épithélio-mésenchymateuses et les interactions avec le stroma, et l’altération de son expression est fréquemment étudiée en lien avec la progression tumorale et le potentiel métastatique. Ces propriétés font de RECK un nœud utile pour étudier le remodelage piloté par les protéases, la régulation du microenvironnement et le dialogue entre voies de signalisation contrôlant l’invasion cellulaire.

RECK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RECK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RECK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RECK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RECK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RECK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RECK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RECK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RECK dans les cellules tumorales présentant une expression de RECK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.