RCC1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402078-LAC

Il gene umano **RCC1** codifica **Regulator of Chromosome Condensation 1**, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) legato alla cromatina per Ran, che stabilisce il gradiente di RanGTP necessario per il trasporto nucleocitoplasmatico. Accoppiandosi alla cromatina durante la mitosi, RCC1 supporta l’assemblaggio del fuso, la riformazione dell’involucro nucleare e la corretta segregazione dei cromosomi, collegandosi così a processi fondamentali della progressione del ciclo cellulare e della stabilità del genoma. L’attività di RCC1 interseca le vie che regolano il controllo del checkpoint mitotico e le risposte al danno al DNA attraverso i suoi effetti sul traffico nucleare e sulla dinamica mitotica. Un’espressione o una funzione deregolata di RCC1 è stata associata a fenotipi proliferativi e a instabilità cromosomica osservati in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici sulla divisione cellulare e sul trasporto nucleare.

Le particelle di attivazione lentivirale RCC1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RCC1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RCC1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RCC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RCC1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RCC1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.