RBMXL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409899-ACT

RBMXL2 codifica una proteina legante l’RNA dotata di un motivo di riconoscimento dell’RNA, implicata nella processamento del pre-mRNA e nella regolazione dei programmi di splicing alternativo. In quanto membro della famiglia RBMX/RBMXL, RBMXL2 è associata al controllo post-trascrizionale dell’espressione genica, collegando le scelte di splicing alle transizioni di stato cellulare e all’organizzazione del trascrittoma специфica dei tessuti. L’alterazione o la deregolazione delle proteine leganti l’RNA e delle vie dello spliceosoma può modificare l’equilibrio tra isoforme e la stabilità dell’RNA, processi frequentemente connessi a proliferazione aberrante, difetti di differenziamento e risposte di stress genomico. RBMXL2 è quindi rilevante per studi che esaminano come le reti di fattori di splicing modellino il metabolismo dell’RNA e influenzino fenotipi trascrizionali associati a malattia.

RBMXL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBMXL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBMXL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBMXL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBMXL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBMXL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBMXL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBMXL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBMXL2 nelle cellule tumorali con espressione di RBMXL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.