Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404141

Übersicht

RASGRF2 kodiert Ras-GRF2, einen durch Calcium und Phospholipide regulierten Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Ras und verwandte kleine GTPasen aktiviert und so die Dynamik der MAPK/ERK-Signalübertragung steuert. Ras-GRF2 integriert Signale aus neuronaler Aktivität und rezeptorvermittelter Signalgebung und beeinflusst dadurch synaptische Plastizität, Neuritenauswuchs und zytoskelettales Remodeling über nachgeschaltete Kinasen und Signalwege der Rho-Familie. Durch die Modulation Ras-abhängiger Transkriptionsprogramme wirkt sich RASGRF2 kontextabhängig auf zelluläre Proliferation und Differenzierungszustände aus. Eine fehlregulierte Kopplung der Ras-Signalwege unter Beteiligung von Ras-GRF2 wurde in neurobiologischen sowie krebsbezogenen Signalmodell-Systemen untersucht, in denen eine veränderte GTPasen-Aktivierung Wachstums- und Überlebensantworten umformen kann.

Das Ras-GRF2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RASGRF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RASGRF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RASGRF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ras-GRF2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RASGRF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ras-GRF2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RASGRF2-Exone abzielen, die für die Ras-GRF2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RASGRF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ras-GRF2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ras-GRF2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RASGRF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ras-GRF2 HDR-Plasmid (h) und Ras-GRF2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RASGRF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RASGRF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.