Rap 2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403109

概要

RAP2A は Rap2A をコードしており、Rap2A は Ras 関連の低分子 GTP アーゼとして GDP 結合型と GTP 結合型の間を循環し、細胞表面受容体の下流におけるシグナル伝達を制御します。Rap2A は、MAPK シグナルや Rho ファミリー GTP アーゼ नेटवर्कとのクロストークを含め、アクチン動態や膜構造に影響する経路を協調させることで、細胞骨格リモデリング、小胞輸送、細胞接着に寄与します。細胞極性、遊走、増殖の制御に関わることから、RAP2A 活性の変化は、がんや炎症性疾患など複数の病態で見られる増殖異常や浸潤性の表現型と関連づけられています。したがって RAP2A は、低分子 GTP アーゼ回路が受容体駆動性シグナルと細胞可塑性をどのように調節するかを解析するうえで有用なノードです。

Rap 2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAP2A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAP2A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAP2Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rap 2Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rap 2Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAP2A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rap 2Aの機能に不可欠なRAP2Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAP2Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rap 2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRap 2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAP2A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rap 2A HDRプラスミド（h）および Rap 2A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAP2Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAP2A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。