RANTES Double Nickase Plasmid (h): sc-401806-NIC

CCL5 kodiert das Chemokin RANTES, einen sezernierten Liganden, der vor allem über CCR1, CCR3 und CCR5 signalisiert und so die Chemotaxis von T‑Zellen, Monozyten, Eosinophilen und NK‑Zellen zu Orten der Immunaktivierung steuert. Die durch RANTES ausgelöste Rezeptorsignalisierung aktiviert G‑Protein‑gekoppelte Signalwege, die den intrazellulären Calciumfluss, PI3K/AKT‑ und MAPK‑Kaskaden, die Integrinaktivierung sowie den Umbau des Zytoskeletts modulieren und damit die Rekrutierung von Leukozyten und die Gewebeentzündung prägen. In der Humanbiologie wird die CCL5‑Expression eng durch entzündliche Transkriptionsprogramme reguliert und trägt zu einer koordinierten Wanderung von Immunzellen in lymphoiden und peripheren Geweben bei. Eine fehlregulierte CCL5/RANTES‑Signalgebung wurde mit chronisch‑entzündlichen Erkrankungen, Autoimmunpathologie und der Immunzellinfiltration im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht, weshalb sie ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur Immunregulation ist.

RANTES Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCL5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCL5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCL5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCL5-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.