RANTES Plasmide Double Nickase (h): sc-401806-NIC

CCL5 codifica la chemochina RANTES, un ligando secreto che segnala principalmente attraverso CCR1, CCR3 e CCR5 per dirigere la chemiotassi di cellule T, monociti, eosinofili e cellule NK verso i siti di attivazione immunitaria. La segnalazione recettoriale guidata da RANTES attiva vie accoppiate a proteine G che modulano il flusso intracellulare di calcio, le cascate PI3K/AKT e MAPK, l’attivazione delle integrine e il rimodellamento del citoscheletro, contribuendo così a plasmare il reclutamento leucocitario e l’infiammazione tissutale. Nella biologia umana, l’espressione di CCL5 è strettamente regolata da programmi trascrizionali infiammatori e contribuisce al traffico coordinato delle cellule immunitarie nei tessuti linfoidi e periferici. Una segnalazione CCL5/RANTES disregolata è stata associata a condizioni infiammatorie croniche, patologie autoimmuni e infiltrazione immunitaria nel microambiente tumorale, rendendola un bersaglio frequente per studi meccanicistici della regolazione immunitaria.

RANTES Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCL5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCL5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCL5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCL5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.