Ran BP-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405001-ACT

RANBP3 codifica Ran BP-3, una proteina legante RanGTP che funge da cofattore dell’esportazione nucleare dipendente da CRM1/XPO1, contribuendo a regolare la distribuzione nucleo-citoplasmatica di proteine e RNA. Modulando i gradienti di RanGTP e l’assemblaggio dei complessi di export, Ran BP-3 partecipa al controllo dei programmi di espressione genica, della progressione del ciclo cellulare e della segnalazione di risposta allo stress attraverso la dinamica del trasporto nucleare. Un’esportazione nucleare deregolata è una caratteristica ricorrente del cancro e di altri stati proliferativi o infiammatori, rendendo RANBP3 un bersaglio utile per studi meccanicistici che collegano difetti di trasporto a reti trascrizionali alterate. Nelle cellule umane, la perturbazione dell’espressione di RANBP3 viene comunemente sfruttata per esplorare la connettività tra traffico nucleare, regolazione trascrizionale e proteostasi.

Ran BP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RANBP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ran BP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RANBP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RANBP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ran BP-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RANBP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ran BP-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ran BP-3 nelle cellule tumorali con espressione di RANBP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.