Rab GDI α Double Nickase Plasmid (h): sc-404659-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab GDI α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab GDI α Double-Nickase-Plasmid (h) und Rab GDI α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GDI1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab GDI α: sc-271846
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab GDI α Double Nickase Plasmid (h) | sc-404659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab GDI α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI1 kodiert den Rab-GDP-Dissoziationsinhibitor Alpha (Rab GDI α), einen zytosolischen Regulator, der an prenylierten Rab-GTPasen bindet und deren Ablösung von Membranen, Solubilisierung sowie den Transport zu Zielkompartimenten während des vesikulären Transports steuert. Durch die Modulation des Rab-Zyklus zwischen membran- und zytosolassoziierten Pools trägt Rab GDI α dazu bei, endozytotische und exozytotische Transportprozesse, Organellidentität und Membrandynamik über verschiedene Signalwege hinweg zu koordinieren, darunter der Transport vom Endosom zum Golgi und das Recycling synaptischer Vesikel. Eine korrekte GDI1-Funktion unterstützt die hohen Anforderungen an den neuronalen Transport, und eine veränderte Regulation des Rab-abhängigen Transports wurde mit neuroentwicklungsbedingten und kognitiven Phänotypen in Verbindung gebracht. In humanen Systemen wird GDI1 häufig als Knotenpunkt untersucht, der Rab-GTPase-Signalgebung mit Proteostase, dem Turnover von Membranrezeptoren und der kompartimentspezifischen Transporttreue verknüpft.
Rab GDI α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GDI1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GDI1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GDI1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GDI1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.